ana sayfa

» Hayvan Yetiştiriciliği

» Hayvan Sağlığı

» Veteriner Hekimlik

» Gıda

» Üretim Tekniği

» Beslenme

» Sağlık

» Mevzuat

» Genel

» Bilir Kişi

» Makine

» Ekolojik Tarım

» Bitki Hastalıkları

» Zararlılar

» Tarım İlaçları

» Sulama

» Gübreleme

» Sebzecilik

» Şifalı Bitkiler

» Peyzaj

» Çiçekçilik

» Ağaçlandırma

» CD - VCD

» Tıp

» Arkeoloji Ve Tarih

» Yeni çıkanlar

» Sipariş

Ana sayfa » Tıp Kitapları »  Hücre Kültür Teknikleri 2: Uygulamalar Kitabı

Yazarı:  Prof.Dr. Topal

Boyu:    (Orta boy)

Sayfa:  224

Basım: 2004

Diğer:   Renkli resimler, şekiller

 

 

Hücre Kültür Teknikleri 2: Uygulamalar Kitabı

 

 

Uygulama 1 :Temel Laboratuvar Teknikleri                                     1

1.1. Laboratuvar Genel Kuralları Prosedürü                            1

1.2. Hücre Kültür Laboratuvarlarında Ne Yapılmalı, Ne Yapılmamalı                                    3

1.2.1. Neler Yapılmalıdır?                                                    3

1.2.2. Neler Yapılmamalıdır?                                                4

1.3. Genel Laboratuvar Talimatları                                        5

 

Uygulama 2; Aseptik Teknik ve İyi Hücre Kültür Uygulama

Teknikleri (Good Celi Culture Practice)                                             7

2.1. Aseptik Çalışma Protokolü                                            7

2.2. Sanitasyon Uygulamaları: Dezenfeksiyon Ve Sterilizasyon 8

2.2.1. Temizlik ve Uygulamaları                                           9

2.2.2. Dezenfeksiyon ve Uygulamaları                                  9

2.2.3. Sterilizasyon Uygulamaları                                          11

 

Uygulama 3: Aseptik Koşullarda Hücre Transfer İşlemleri         13

3.1.  Giriş                                                                           13

3.2.  Aseptik Teknik Ve Uygulama Prosedürü                          13

3.2.1. "Öze (Loop)" ile Kültürün Aseptik Transfer İşlemi

["Ekim Tekniği" (İnokülasyon = Inoculating)]                        13

3.2.1.1. Gelişen Mikroorganizmaların Sıvı Kültür Ortamından

Aktarımla Saflaştırılmaları   (Ayrılmaları = İzolasyonları)          14

3.2.1.2. Gelişen Mikroorganizmaların Katı Ortamdan

(Yüzey Kültürden) Taşınması                                               15

3.2.2. Sürme Tekniği ile Saf Kültür Eldesi İçin İnokulümün

Petri Kutusuna Aktarımı                                                       16

3.3. Besi Ortamları ve Özellikleri                                          19

3.3.1. Besi Ortamlarının Genel ve Bileşim Özellikleri               19
3.3.1.1. Besi Ortamlarına Giren Temel Bileşenler                    20

3.3.2. Besi Ortamlarının Çeşitleri                                         21

3.3.3. Besi Ortamlarının Hazırlanması                                   22

3.4. Besi Ortamı İle Organizmaların Üreme İlişkileri                23
3.4.1. Çeşitli Kültürel Gelişim Şekilleri                                   23

3.4.1.1. Hücre Kültürlerinde Gelişme İçin Oksijen Gereksinimine

Göre Gruplar                                                                      25

3.4.1.2. Hücre Kültürlerinde Gelişme İçin Sıcaklık Gereksinimlerine

Göre Gruplar                                                                      25

3.4.1.3. Kültürlerin Koloni Yapılarına Göre Grup Özellikleri        26
3.4.1.4 Koloni Morfolojisi                                                     26
3.4.1.5. Değişik Pigmentasyon Formları                                27

3.5. Hücre Kültür Transferi (Aşılama) Uygulama Prosedürü       29

 

Uygulama 4: Kültürel Sayım Teknikleri                                             33

4.1. Hücresel Kültür Ortamlarında Kantitatif Değerlendirmeye

Yönelik Genel Bilgiler                                                          33

4.1.1. Plak Kültür Sayım Yöntemi (Plate Culture Count)          33

4.1.2. Direkt Mikroskobik Sayım Yöntemi = Doğrudan

Mikroskobik Sayım Yöntemi                                              34

4.1.2.1. Petroff-Hausser Lamıyla Sayım                              35

4.1.2.2. Thoma Lamı ile Sayım Yöntemi                               36

4.1.2.3. Breed Yöntemi                                                      37

4.1.2.3.1. Mikroskop Görüş Sahası Alanının Hesaplanması     38

4.1.2.3.2. Breed Yöntemi ile Hücre Sayımının Yapılması         39

4.1.2.3.3. Mikroskop Faktörünün Hesaplanması                    40

4.1.2.3.4. Breed Yöntemin Uygulanması                              41

4.1.2.4. Howard Lamı ile Küflü Saha Sayımı                           41

4.1.3. Bulanıklık Ölçüm Yöntemi (Optik Yoğunluk Ölçüm

Tekniği :"Türbidimetrik" Yöntem (Spektrofotometrik Yöntemi) 43

 

Uygulama 5: Hücre Kültüründe  Diğer Mikroskobik Sayım Teknikleri

ve Hücresel Özelliklerin İncelenmesi                                                49

5.1. Giriş : Mikroskopla İlgili Genel Bilgi                                49

5.1.1. Mikroskobun Temel Parçalan                                     51

5.1.2. Mikroskop Türleri                                                      51

5.1.2.1. Işık Mikroskobu                                                     51

5.1.2.2. Transmisyon (Transmission) Elektron Mikroskobu (TEM)  52

5.1.2.3. Elektron Tarama Mikroskobu (The Electron Scanning

Microscope - SEM)                                                               52

5.1.3.  Mikroskobik Çalışmalar İçin Önemli Bilgiler ve Mikroskop
Çalışmalarında Özen Gösterilmesi Gereken Temel Hususlar     52

5.1.4.  Mikroskop Yardımıyla Hücre Boyutunun Ölçülmesi          53

 

Uygulama 6: Direkt - İndirekt Hücre Boyama Teknikleri ve

Mikroskobik İnceleme                                                                           57

6.1. Hücre Boyama Teknikleriyle İlgili Genel Bilgiler                57
6.1.1. Basit Boyama İşlemindeki Kritik Uygulamalar               58

6.1.1.1. Hücre Kültürü Katı (Agarlı) Kültür Ortamından Alınıyorsa  58

6.1.1.2. Hücre Kültürü Sıvı Kültür (Broth Culture) Ortamından Alınıyor ise  60

6.2. Bazik Karakterli Boyalar Kullanılarak Direkt (Doğrudan / Basit)

Boyama Uygulaması                                                           60

6.3. Asidik Boya Kullanılarak İndirekt (Dolaylı) Boyama Uygulaması  62

 

Uygulama 7: Gram Ve Kapsül Boyama Teknikleri                          67

7.1. Gram boyama                                                             67

7.1.1. Genel Bilgi                                                               67

7.1.2. Gram Pozitif Bir Bakterinin Gram Negatif Gibi Boyanmasına

Yol Açan Faktörler                                                               67

7.1.2.1. Gram-pozitif Hücre Duvarı                                       67

7.1.2.2. Gram-negatif Hücre Duvarı                                      68
7.1.3. Gram Boyama Prosedürü                                            68

7.2. Kapsül Boyama                                                          71
7.2.1. Genel Bilgi                                                                71

 

Uygulama 8 : Endospor Boyama ve Bakteriyel Hareketlilik İnceleme

Teknikleri                                                                                                  75

8.1. Endospor Yapısı                                                           75

8.1.1. Genel Bilgi                                                               75

8.1.2. Spor Boyama Tekniği ve Uygulaması                           79

8.2. Bakteriyel Hareketlilik (Motility)                                     82

8.2.1. Genel Bilgi                                                               82

8.2.2. Özel Amaçlara Göre Geliştirilmiş Mikroskoplar Kullanılarak
Hareketliliğin Doğrudan Belirlenmesi                                     84

8.2.2.1. Faz - Kontrast Mikroskopisi (Phase - Contrast Microscopy)  84

5.2.2.1. Karanlık - Alan Mikroskopisi (Dark - Field Microscopy) 85

8.2.3. Hareketlilik Test Ortamı (Motility Test Medium)             85

8.2.4. Flagella Boyama (Flageila Staining)                             86

 

Uygulama 9: Biyokimyasal Testlerle Bakterilerin Tanımlanması 91

9.1. Genel Bilgi                                                                  91

9.1.1. Nişasta Hidrolizi                                                        91

9.1.1.1. Genel Bilgi                                                             91

9.1.2.   Protein Hidrolizi                                                        93
9.1.2.1. Genel Bilgi                                                             93

9.1.3.   Karbonhidratların Fermantasyonu                                95
9.1,3.1. Genel Bilgi                                                             95

9.1.4.   İndol ve Hidrojen Sülfür Üretimi                                  97
9.1.4.1.Genel Bilgi                                                              97

9.1.5.   Katalaz Aktivıtesi                                                      99
9.1.5.1. Genel Bilgi                                                             99

 

Uygulama 10:   Doğrudan (Direkt) Serolojîk Yöntemler              105

10.1. Serolojik Analizlere Giriş                                              105

10.1.1. Enfksiyon Yaratan İmmünolojik Karakterli Hastalıklar   107

10.1.1.1. Mikrobiyal Yapılar                                                 107

10.1.1.2. Mikrobiyal Eksotoksinler                                        107
10.2. Seroloji                                                                     108

10.2.1. Direkt (Doğrudan) Serolojik Test                               108

10.2.2. İndirekt (Dolaylı) Serolojik Test                                 108
10.3. Laboratuarda Antijen-Antikor Reaksiyonları Kullanılarak

Mikroorganizmalar Gibi Bilinmeyen antijenlerin Tanımlanması  109

10.3.1.   Hayvanlarda Bilinen Antikorların

(Antiseraların) Hazırlanması                                                 109

10.3.2.   Bilinen Antikorların "Monokbnai antikor Tekniği" ile

Hazırlanışı                                                                         109

10.3.3.   Doğrudan (Direkt) Serolojık Kontrol Yaklaşımı ve

Uygulamaları                                                                     111

10.3.4.   Antijen-Antikor Reaksiyonlarına Dayalı Sonuçların

Laboratuarda Belirlenmesi                                                   111

10.3.4.1.   Aglutinasyon                                                      111

10.3.4.2.Presıpitasyon                                                         112

10.3.4.3. Komploment Fiksasyonu                                       112

10.3.4.4. ELİSA Tekniği                                                       112

10.3.4.5. Radyoaktif Bağlanma Teknikleri                             112

10.3.4.6. Floresans Boyama Tekniği                                     112
10.4. Doğrudan Serolojik Testlerle Bilinmeyen Antijenlerin

Tanımlanması                                                                    112

10.4.1. Shigella'nın Serolojik Tipleme Yöntemleri                   112

10.4.2. Streptococci'nin Serolojik Yolla Belirlenme Yöntemi      113

10.4.3. Hamileliğin Belirlenmesinde kullanılan Serolojik Test   114

10.4.4. "Direkt Floresans Antikor Tekniği" Kullanarak

Mikroorganizmaların Belirlenmesi                                         116

 

Uygulama 11: Dolaylı (İndirekt) Serolojik Yöntemler                   121

11.1. Antijen - Antikor Reaksiyonlarını Kullanarak Hastalıkların Dolaylı

Yollarla Teşhisleri                                                               121

11.2. Aglutinasyon                                                              121

11.2.1.   Doğrudan (Direkt) Antiglobulin (Coombs) Testi           123

11.2.2.   Dolaylı Antiglobulin (Coombs) Testi                           123

11.2.3.   Brucella abortus Testi (Kart- Kit Yöntemiyle)               124

11.3.  Presipitasyon                                                             124
11.3.1. Kan Grubu Tayini Amacıyla Presipitasyon Tekniğinin Kullanımı 125

11.4.  Komplement (Tamamlayıcı) Fiksasyon Yöntemi             125
11.4.1. Bovine Herpes Virüsü (Bulaşıcı Sığır Rinotrake İltihabı-

Rhinotracheitis) Tanısı için   Komplement Fiksasyon (CF)Testi  127

11.5. İmmünolojik Yolla Enzim Reaksiyonu [Enzim İmmununoassay

Testi (EIA)]                                                                           128

11.5.1. ELİSA Tekniğinin Farklı Amaçlara Göre Uygulanmaları   128

11.5.1.1. Antikorların Saptanmasında ELİSA Tekniğinin Kullanımı  128

11.5.1.2. Antijenlerin Saptanmasında ELİSA Tekniğinin Kullanımı  129

11.5.1.3. Rekabetçi (Competitive) ELİSA Tekniğinin Uygulanması 129

11.5.2.Yabancı Bir Antijene Karşı Gelişen Antikorları Saptamakta

EIA ve Western Blot (Immunoblot) Serolojik Testleri               130

11.5.2.1. Western Blot (Immunoblot) Tekniğinin Uygulanması 134

11.6.   Radyoaktif bağlanma teknikleri                                   134
11.6.1. Radyoaktif Yolla Enzim Testi - Radio immunoassay (RIA)  135

11.7.   Floresans Antikor Tekniği                                            135
11.7.1. Doğrudan Floresans Antikor (FA) Test Tekniği             136

 

Uygulama 12: Fiziksel Ajanlar Kullanılarak

Mikroorganizmaların Kontrolü                                                             137

12.1. Mikroorganizmaların Kontrolüne İlişkin Genel Bilgiler      137

12.1.1. Sterilizasyon                                                           137

12.1.2. Dezenfeksiyon                                                        137

12.1.3. Kemoterapötik (Kimyasal Tedavi Edici) Antimikrobiyal

Kimyasallar                                                                        138

12.2. Sıcaklık Uygulaması                                                    138

12.2.1. Yüksek Sıcaklık Uygulaması                                      138

12.2.1.1. Nemli Yüksek Sıcaklık Uygulaması                          138

12.2.1.1.1. Otoklavlama                                                    138

12.2.1.1.2. Kaynar Su Uygulaması                                       139

12.2.1.2. Kuru Sıcaklık Uygulaması                                        139

12.2.1.2.1. Kuru Sıcaklıkla Sterilizasyon                               139

12.2.1.2.2. Yakma                                                              139

12.2.1.3. Pastörizasyon                                                        139

12.2.2.Düşük Sıcaklık Uygulaması                                          139

12.3. Kurutma Uygulaması                                                  139

12.4. Osmotik Basınç Uygulaması                                        140

12.5. Radyasyon Uygulamaları                                             141

12.5.1. Ultraviyole Radyasyon                                              141

12.5.2. İyonize Radyasyon                                                  142

12.6. Filtrasyon Uygulamaları                                                 142

 

Uygulama 13: Hücre Kültür Laboratuarının Tasarımı ve

Temel Ekipmanlar                                                                                   149

13.1. Giriş                                                                         149

13.1.1.   Laboratuvar Tasarımı                                               149

13.1.2.   Mikrobiyolojik Güvenlik Kabinleri                               149

13.1.3.   Santrifüjler                                                             150

13.1.4.   İnkübatörler                                                           150

13.1.5.   Çalışma Yüzeyleri ve Zemin Yüzeyleri                        150

13.1.6.   Plastik ve Tek Kullanımlık (Atılabilir - Disposible) Gereçler  150

13.1.7.   La boratuvar Alanlarının Bakım ve Kullanımı                150

13.2. Hücre Kültürü için Güvence Koşulları                              151
13.2.1. Risk değerlendirmesi                                               151

13.2.2.   Laboratuvar Dezenfeksiyon Uygulamaları                   151

13.2.3.   Atıkların Uzaklaştırılması                                          152

13.3.  Kaynak Hücre Toplulukları (Hücre Kültür Koleksiyonları)   152

13.4.  Başlıca Hücre Kültür Tipleri                                           153

13.4.1.   Birincil (Primer) Kültürler                                           153

13.4.2.   Sürekli Kültürler                                                      153

13.4.3.   Morfolojik Özellikler Bazında Farklılaşmış Kültürler       153

13.5. Hücre Kültür Ortamının Genel Özellikleri                        153

13.5.1.  Besi Ortamının Ana Bileşenleri                                   153

13.5.2.  İnorganik Tuzlar                                                      154

13.5.3.  Tampon Sistemleri                                                  154

13.5.4.  Karbonhidratlar                                                       154

13.5.5.  Vitaminler                                                               154

13.5.6.  Proteinler ve Peptitler                                               154

13.5.7.  Yağ asitleri ve Lipitler                                               154

13.5.8.  Eser Elementler                                                       154

13.5.9.  Serum                                                                    155

13.6. Kriyoprezervasyon Tekniği ve Hücre Kültürlerinin Saklanması  155

13.6.1.  Hücre Kültürlerinin Kriyoprezervasyon Tekniği ile Saklanması     155

13.6.2.  Hücre Kültürlerinin Çok Düşük Sıcaklıklarda Saklanması  156

13.6.3.  Laboratuvarlar Açısından Güvenlik Kaygıları                 156

13.7.  İyi Hücre Bankası Uygulamaları (Good Cell Banking Practice)  157

13.8.  Laboratuvar Güvenliğinde Kalite Kontrol Kavramları         157

13.8.1.  Genel Bilgi                                                              157

13.8.2.  Resktifler (Kimyasallar) ve Laboratuvar Materyali         158

13.8.3.  Hücre Kültürlerinin Doğruluk ve Uyumları                    158

13.8.4.  Mikrobiyal   Bulaşmaların (Kontaminasyonun) Önlenmesi  158

13.8.5.  Çevresel Gözlemleme                                              159

13.8.6.  Antibiyotik bulaşısı ve Alınabilecek Önlemler               159

13.9. Hücre Topluluklarının (Kolonilerin) Belirlenmesi              159

13.9.1.   Belirleme Teknikleri                                                 159

13.9.2.   İzo-enzim Analizi                                                    159

13.9.3.   DNA parmak İzi (Finger printing) Tekniği                    160

13.9.4.   DNA için Çoklu Bölgeli (Locus'lu) Parmak izi (Finger printing)

Tekniği                                                                             160

13.9.5. Çoklu Tipte (Multiplex) Polimeraz Zincir Reaksiyonu =

Polymerase Chain Reaction (PCR) ile DNA Profilleme Çalışması   160

13.10. Alternatif Hücre Kültür Ölçüm Sistemleri                       161

13.10.1. Hücre Kültürü Ölçüm Sistemleri                                161
13.10.2   Ölçek Büyütme Tekniği ile Hücre Süspansiyonları

(Scale-up Solutions)                                                           161

13.10.3. Döner Şişe Kültür Tekniği (Roller Bottle Culture)        162

13.10.4 Boyunlu (Karıştırıcılı) Erlen Kültür Tekniği (Spinner Flask Culture)                                                                                163

13.10.5 Diğer Ölçüm Seçenekleri                                       164

Kaynaklar                                                                         165
Hücre Fizyolojisi ile İlgili Temel Terimler Sözlüğü                    167
DİZİN                                                                               185

 

««  Bulunduğu kategoriye git

««  Fiyatını öğrenmek istiyorum

«»

  Sayfanın başı